wyklad12.pdf

Genetyka oglna

wykład dla studentw II roku biotechnologii

Andrzej Wierzbicki

Uniwersytet Warszawski

Wydział Biologii

andw@ibb.waw.pl

http://arete.ibb.waw.pl/private/genetyka/

Metody genetyki molekularnej

1. Trawienie restrykcyjne i ligacja pozwalają na

uzyskiwanie sztucznych cząsteczek DNA

2. PCR pozwala amplifikować dowolne

cząsteczki DNA

PCR

Zastosowania PCR

¤klonowanie genw o znanej

sekwencji

¤klonowanie genw o

sekwencji możliwej do

odgadnięcia

¤sprawdzanie obecności

jakiejś sekwencji

¤analiza ilościowa

Hybrydyzacja

Hybrydyzacja Southerna

Ustalanie liczby kopii transgenu

¤trawienie enzymem tnącym w obrębie transgenu

¤następne miejsce trawienia już poza transgenem

¤miejsce integracji losowe - odległość od drugiego miejsca

restrykcyjnego też losowa

¤liczba prążkw świadczy o liczbie kopii transgenu

wykrywanie rearanżacji w genomie

¤trawienie enzymem tnącym jeden raz w obrębie badanej

sekwencji - wykrycie transpozycji transpozonu

¤trawienie enzymem tnącym wiele razy obrębie badanej sekwencji

- wykrycie zmiany w budowie sekwencji