IZOLACJA Z ŻELU CZYLI JAK ODZYSKAĆ DNA.pdf
(
122 KB
)
Pobierz
274050925 UNPDF
IZOLACJA Z ŻELU CZYLI JAK ODZYSKAĆ DNA.
http://zguw.ibb.waw.pl/%7Eknbm/bmwi/podrek/lab/lab6.html
IZOLACJA Z ŻELU CZYLI JAK ODZYSKAĆ DA.
Izolacja z żelu jest niezbędnym etapem w szeregu doświadczeń. Jest konieczna gdy po
rozdziale pragniemy wykorzystać do dalszej pracy pewną określoną frakcję materiału
lokującego się w odpowiednim prążku.
Istnieje wiele metod odzyskiwania DNA z żeli jednak żadna z nich nie jest
pozbawiona wad.
Istotne problemy przy izolacji to :
obecność inhibitorów reakcji enzymatycznych np. obecne w agarozie
zanieczyszczenia w postaci polisacharydów , które hamują aktywność enzymów
używanych przy dalszej obróbce klonowanego DNA
niezbyt duża skuteczność odzyskiwania dużych fragmentów DNA ponieważ
wydajność izolowania jest funkcją ciężaru cząsteczkowego tych fragmentów , za
wielkość graniczną dla dobrej izolacji przyjmuje się długość 5 kb
im mniejsza ilość DNA na żelu tym mniejsza wydajność jego odzyskiwania , izolacja
staje się nieskuteczna przy ilościach mniejszych niż 500 ng
nie ma możliwości izolacji jednocześnie kilku fragmentów o różnej długości.
Metody :
1. Izolacja DA z użyciem DEAEcelulozy.
Polega na przyczepieniu się migrującego DNA do umieszczonej w żelu membrany z
DEAEcelulozą , którą następnie odpłukuje się z zanieczyszczeń buforem o niskiej
sile jonowej a potem eluuje z niej DNA buforem o wysokiej sile jonowej. Należy
pamiętać , że z membran nie podlega elucji jednoniciowe DNA oraz fragmenty
powyżej 15 kb.
2. Elektroelucja do woreczków dializacyjnych.
Najefektywniejsza do izolacji dużych fragmentów DNA powyżej 5 kb. Po
odpowiednim rozdzieleniu wycina się konkretny prążek DNA , umieszcza w
woreczku dializacyjnym , który wkłada się do aparatu do
elektroforezy
i prowadzi ją
przez jakiś czas po czym na krótko odwraca się bieguny i prowadzi elektroforezę
1 z 2
20100404 13:26
IZOLACJA Z ŻELU CZYLI JAK ODZYSKAĆ DNA.
http://zguw.ibb.waw.pl/%7Eknbm/bmwi/podrek/lab/lab6.html
przez minutę co pozwala na uwolnienie DNA ze ścian woreczka. Woreczek
dializacyjny zostaje przepłukany odpowiednim buforem i po dodaniu kilku
specjalnych odczynników i wirowaniu otrzymujemy preparat DNA.
3. Metoda "freezesqeeze".
Jest to bardzo szybka metoda izolacji. Tak jak poprzednio po elektroforezie zostaje z
żelu wycięty konkretny prążek. Fragment żelu umieszczony w probówce , na dnie
której znajduje się niewielka ilość silikonowej szklanej waty , zamraża się w ciekłym
azocie (freeze) a następnie wkłada się jedną probówkę w drugą po zrobieniu w tej
pierwszej niewielkiego otworku na dnie. Kolejnym etapem jest wirowanie (sqeeze).
Uzyskany w ten sposób bufor poddaje się jeszcze kilku zabiegom wytrącania i
wirowania , po których otrzymujemy wyizolowane DNA.
ELEKTROFOREZA WĘDRÓWKA W ŻELU
SEKWENCJONOWANIE SĄ JUŻ DO TEGO MASZYNY
(c) 1997, 1998 Biologia Molekularna w Internecie
Webmaster
2 z 2
20100404 13:26
Plik z chomika:
Nomnomnom2110
Inne pliki z tego folderu:
Zastosowanie genetyki w hodowli, rolnictwie i medycynie.docx
(16 KB)
Perspektywy rozwoju genetyki.docx
(19 KB)
transkrypcja - regulacja.pdf
(3175 KB)
transkrypcja.pdf
(3038 KB)
Histologia i fizjologia macierzy.pdf
(1266 KB)
Inne foldery tego chomika:
Analityka med
analiza instrumentalna
anatomia
Biochemia
biochemia kliniczna
Zgłoś jeśli
naruszono regulamin