Paulina Krzemińska 2.11.2011r.
Opis doświadczenia 2:Aminokwasy – właściwości i reakcje.
W poniższych reakcjach wykorzystywałam roztwór białka jaja kurzego dostępny dla całej grupy, który został sporządzony poprzez oddzielenia białka od żółtka i dodanie do niego 100 ml dwuprocentowego roztworu NaCl.
Przeprowadzone reakcje:
1. Reakcja ninhydronowa:
Reakcja ta opiera się na szeregu reakcji utleniania a-aminokwasów oraz redukcji ninhydryny podczas której powstaje barwnik zwany purpurą Ruhemanna o barwie fioletowoniebieskiej oraz aldehyd o liczbie atomów węgla o 1 mniejszej, niż wyjściowy aminokwas.
Dodany odczynnik
Glicyna
Prolina
Białko
Badany aminokwas
H2O
Roztwór ninhydryny w etanolu + ogrzewanie / obserwacje
Zawartość probówki od razu po dodaniu odczynnika stała się fioletowa, po ogrzaniu roztwór miał granatowe zabarwienie
Zabarwienie lekko żółte, a po podgrzaniu pomarańczowe
Po dodaniu odczynnika powstały dwie warstwy, górna była mętna; po ogrzaniu górna warstwa była ciemnoniebieska, a dolna stała się mętna i miała kolor fioletowy
Po ok. minucie od dodania odczynnika probówka zabarwiła się delikatnie na fioletowo, natomiast po podgrzaniu na granatowo
Roztwór nie zmieniał się
Wnioski
W pierwszej, trzeciej i czwartej probówce wykryłam a-aminokwas.
2. Reakcja z kwasem azotowym (III) van Slyke’a:
Reakcja ta polega na przeprowadzeniu deaminacji naszych aminokwasów.
NaNO2 + CH3COOH / obserwacje
Wydzieliły się pęcherzyki gazu
Po wstrząśnięciu probówką wytrącił się kłaczkowaty osad, a na powierzchni cieczy roztwór zaczął się pienić
Wszystkie probówki zawierają grupę aminową.
3. Reakcja biuretowa Piotrowskiego:
Próba ta ma na celu wykrycie wiązania peptydowego, które daje niebiesko-fioletowe kompleksy z dwudodatnim jonem miedzi. Daje pozytywny wynik, gdy w cząsteczce występują przynajmniej 2 tego typu wiązania.
Arginina
Dipeptyd
Tripeptyd
NaOH + CuSO4 / obserwacje
Lekko niebieski
Po dodatku NaOH: zmętnienie; po dodatku CuSO4: niebieski kolor
Fioletowy
Wnioski:
Moje doświadczenie potwierdziło wiele wiązań peptydowych tylko w przypadku białka. Powinno również potwierdzić w przypadku tri peptydu. Nieprawidłowe obserwacje mogą być spowodowane niezbyt czystymi odczynnikami
4. Reakcja cystynowa:
Ogrzewanie aminokwasu w silnie alkalicznym środowisku powoduje wydzielenie się jonów siarczkowych z cysteiny bądź cystyny, które następnie identyfikujemy wytrącając je z Pb2+i otrzymując czarny osad.
Cysteina
Cystyna
Metionina
NaOH + ogrzewanie + Pb(CH3COO)2 / obserwacje
Żółto-brązowa
Czarny osad
Cysteina lub jej pochodne zostały wykryte w probówkach 2, 3 i 6.
5. Reakcja z nitroprusydkiem sodu na obecność grup sulfhydrylowych cysteiny:
Reakcja ta daje pozytywny wynik jedynie z cysteiną, z którą nitroprusydek sodu tworzy kompleks o czerwonym zabarwieniu, który jest bardzo nietrwały i jego kolor zaraz po zajściu reakcji zanika.
Nitroprusydek sodu + stały siarczan amonu + stężony NH3 / obserwacje
pu_lina