cytogenet.doc

MATERIAŁ DO BADANIA CYTOGENETYCZNEGO:

krew żylna (2-10 ml) - heparyna

fibroblasty (wycinek)

szpik kostny (4 ml) – heparyna płynna sodowa

krew pępowinowa (1-2 ml) - heparyna

płyn owodniowy (15-20 ml)

wycinki guza

fragmenty tkanek (kosmówka, jajniki)

HODOWLA limfocytów krwi obwodowej:

2 hodowle dla jednego pacjenta!!!!

Czas     72 h

T          37*C

SKŁAD HODOWLI:

4 ml podłoża z antybiotykiem (np. gentamycyna)

1 ml surowicy

1 ml LF (mitogen)

1 ml krwi pacjenta

HODOWLA komórek szpiku kostnego:

4 hodowle dla jednego pacjenta!!!!

Czas     24 h i 48 h

T          37*C

Przepływ CO2

SKŁAD HODOWLI:

5 (4) ml podłoża z antybiotykiem -  np. Marrowmax

(1 ml surowicy)

1 ml szpiku pacjenta

HODOWLA komórek z płynu owodniowego:

(badanie prenatalne)

2 hodowle dla jednej pacjentki!!!!

Czas     2-3  tygodnie

Temp.   37*C

Przepływ CO2

Dwie cieplarki

SKŁAD HODOWLI:

6 ml podłoża z antybiotykiem -  np. Amniomax

1 ml surowicy

7 ml płynu owodniowego

Co około 7 dni wymiana podłoża

HODOWLA fibroblastów (tkanek):

2 hodowle dla jednego pacjenta!!!!

Czas:    około 1 – 2 tygodnie

Temp.   37*C

Przepływ CO2

Roztwór tkanki w kolagenazie (2,5 mg/ml, T pok.)

SKŁAD HODOWLI:

7 ml podłoża do tkanek z antybiotykiem ( np. gentamycyna)

2 ml tkanki

izolacja

GTG

15 metafaz o odpowiedniej rozdzielczości prążkowej

Co najmniej 2 kariogramy

3 komórki z brakującym chromosomem lub dwie z dodatkowym = analiza 50 metafaz

Barwienia:

Biologia molekularna w medycynie. PWN 2001. pod red. J. Bala

Rozdzielczość prążkowa: liczba prążków w haploidalnym zestawie chromosomów

Najmniejsza rozpoznawalna aberracja:

7-10 x 106 pz przy rozdzielczości 400 prążków

2-5 x 106 pz  przy rozdzielczości 850 prążków

Minimalny standard jakości preparatów chromosomowych w odniesieniu do wskazania do oceny kariogramu