cwicz25pl.pdf

ĆWICZENIE NR 25

WYZNACZENIE LICZBY ERYTROCYTÓW ZA POMOCĄ

ELEKTROHEMOSKOPU HELLIGE'A

CZĘŚĆ TEORETYCZNA

Elementy morfotyczne krwi: erytrocyty, płytki krwi i leukocyty stanowią ok. 45 - 50%

całej objętości krwi. Najliczniejszą grupę tych elementów stanowią erytrocyty i u zdrowego

człowieka ich liczba wynosi ok. 4 - 5 mln/ µ l krwi. Odchylenia od tych wartości są istotnym

wskaźnikiem diagnostycznym w stanach patologicznych. W laboratoriach stosuje się wiele

metod wyznaczania liczby krwinek czerwonych, przy czym do najpopularniejszych zaliczyć

można wyznaczanie liczby hematokrytowej czy bezpośrednie zliczanie krwinek w polu

widzenia mikroskopu optycznego. Ostatnio coraz częściej stosowana jest metoda

turbidymetryczna, polegająca na mierzeniu natężenia światła rozproszonego na elementach

morfotycznych zawieszonych w izotonicznej cieczy. Przyrząd, którego schemat przedstawia

poniższy rysunek, pozwala łatwo, szybko i dość precyzyjnie określić liczbę erytrocytów we

krwi.

Zasada działania przyrządu jest następująca: z otworu M wychodzi wiązka światła,

która jest skupiona przez soczewkę S ustawioną tak, aby światło padało na przesłonę P

pochłaniającą światło. Jeżeli naczynie N jest wypełnione cieczą, która nie rozprasza światła, to

brzegi plamki świetlnej są prawie ostre i światło w całości zostaje pochłonięte przez przesłonę

P, w wyniku czego na fotoopornik F pada tylko znikoma ilość światła, a mikroamperomierz

wskazuje nieznaczne natężenie prądu. Jeżeli do cieczy wprowadzimy krwinki, to zachodzi

zjawisko Tyndalla, czyli rozpraszanie światła na cząsteczkach koloidu. Im większa jest liczba

krwinek, tym więcej światła ulega rozproszeniu. Padające światło wywołuje wzrost liczby

nośników prądu elektrycznego w fotooporniku, powodując wzrost przewodności tego

fotoopornika. Efektem jest wzrost płynącego przez fotoopornik natężenia prądu

odczytywanego przez mikroamperomierz. Wzrost ten jest proporcjonalny do ilości

rozproszonego światła. Równocześnie z rozpraszaniem zachodzi zjawisko absorpcji światła

przez krwinki, które przy bardzo wysokim stężeniu koloidu powoduje spadek natężenia światła

rozproszonego, co odnotowujemy jako spadek wartości natężeń odczytywanych na

mikroamperomierzu.

CZĘŚĆ DOŚWIADCZALNA

I. Wykonanie krzywej wzorcowej:

1. Za pomocą przełącznika włączyć źródło światła.

2. Uprzednio umytą i dokładnie wysuszoną kuwetkę wypełnić do wysokości 2/3 naczynia

izotonicznym roztworem (PBS) i wstawić do przyrządu. Wyzerować elektrohemoskop .

3. Wkraplać do kuwetki kolejno po jednej kropli uprzednio wymieszanego wzorcowego

roztworu krwi (za każdym razem mieszając starannie bagietką) i odczytywać kolejne

natężenia prądu I 1 , I 2 , ...., I n . Każda z dodanych kropli zawiera 1 mln erytocytów.

Krople dodajemy do chwili, gdy przestaniemy obserwować wzrost natężenia prądu (zwykle

po dodaniu 14 - 16 kropli).

Uwaga! Kolejnych pomiarów natężenia prądu dokonywać tylko przy zasłoniętym otworze

przyrządu.

4. Po wykonaniu I serii pomiarów i wymyciu kuwetki, w celu uzyskania średnich wartości,

wykonać II, a następnie III serię. Wyniki umieścić w tabeli I.

Tabela I

LICZBA

KROPEL

NATĘŻENIE PRĄDU I n [ µ A]

ŚREDNIE

NATĘŻENIE

PRĄDU [ µ A]

SERIA I

SERIA II

SERIA III

5. Z uzyskanych wartości natężeń sporządzić krzywą wzorcową I=f(n) ,

gdzie:

I - średnie natężenie światła rozproszonego przez erytrocyty [ µ A]

n - liczba erytocytów [mln]

II. Wyznaczenie liczby erytrocytów w roztworze o nieznanej ich liczbie:

1. Powtórzyć czynności opisane w punkcie I. 1. i I. 2.

2. Do kuwetki wkroplić 2, 4 i 6 kropli roztworu X, przygotowanego przez asystenta.

3. Odczytać kolejne natężenia prądu I x2 , I x4 i I x6 .

4. Wyniki zapisać w tabeli II.

Tabela II

LICZBA KROPEL

NATĘŻENIE

PRĄDU I

[ µ A]

5. Korzystając z uprzednio sporządzonej krzywej wzorcowej wyznaczyć liczbę erytrocytów

w 1 kropli krwi.

Sprawozdanie powinno zawierać_:

1. Schemat przyrządu.

2. Tabele pomiarów.

3. Krzywą wzorcową.

4. Wyznaczenie liczby erytrocytów w 1 kropli roztworu o nieznanej ich liczbie.

Plik z chomika:

Inne pliki z tego folderu:

Inne foldery tego chomika: