Elisa.pdf

Przeciwciała jako narzędzia

badawcze

Co to są przeciwciała

• Przeciwciała lub immunoglobuliny –białka wydzielane przez

komórki plazmatyczne (czyli pobudzone limfocyty B) w przebiegu

odpowiedzi immunologicznej typu humoralnego (łac. humor –płyn),

które mają zdolność do swoistego rozpoznawania antygenów .

• Jako część układu opornościowego u człowieka i innych

kręgowców przeciwciała odgrywają zasadniczą rolę w obronie

organizmu przed drobnoustrojami i pasożytami

• Głównym zadaniem przeciwciał jest wiązanie i immobilizacja

patogenu, co umożliwia z kolei zachodzenie innych procesów m.in.

fagocytozy, aktywacji dopełniacza itd.

• Są białkami syntetyzowanymi przez zwierzęta w odpowiedzi na

pojawienie się w ustroju obcych substancji

• Obca makrocząsteczka zdolna do wywoływania syntezy

przeciwciała jest nazywana antygenem (lub immunogenem)

• Białka, polisacharydy i kwasy nukleinowe są zazwyczaj

efektywnymi antygenami. Swoiste powinowactwo przeciwciał nie

dotyczy całej makrocząsteczki antygenu, ale pewnego jego

miejsca, zwanego determinatąantygenową (albo epitopem ).

Schemat budowy przeciwciał

•Budowa przeciwciał wszystkich klas jest

podobna. Są to cząsteczki o kształcie

zbliżonym do litery „Y” zbudowane z

dwóch par identycznych łańcuchów

peptydowych. Dwa z tych łańcuchów,

określane mianem łańcuchów ciężkich

(H) – na rysunku kolor niebieski.

Pozostałe dwa łańcuchy, nazywane

lekkimi (L)– kolor zielony.

• Odcinki z N-końcówłańcuchów lekkich i

ciężkich (1) wykazują zmienność

sekwencji aminokwasowej, natomiast

sekwencja C-końców tych łańcuchów jest

stosunkowa stała (2)

• Odcinki zmienne są miejscami wiązania

antygenu

•Jako narzędzia badawcze stosowane są

głównie immunoglobulin klasy G (IgG)

narzędzia w

metodach immunochemicznych

poliklonalne i monoklonalne

i monoklonalne - narzędzia w

metodach immunochemicznych

Przeciwciała poliklonalne- preparat cząsteczek przeciwciała uzyskany z kilku różnych klonów

komórek limfocytów B jest nazywany przeciwciałem poliklonalnym. Jest to mieszanina cząsteczek

przeciwciał, które wiążą się z różnymi częściami antygenu (tzw. epitopy ) z różnym

powinowactwem.

Przeciwciała monoklonalne - przeciwciała wytwarzane przez pojedynczy klon komórek to

przeciwciała monoklonalne; wszystkie cząsteczki tych przeciwciał są identyczne i wiążą się z tym

samym miejscem antygenu (epitopem) z identycznym powinowactwem. Przeciwciała monoklonalne

można uzyskać w dużych ilościach dzięki fuzji pojedynczej komórki limfocytu B wytwarzającej

przeciwciało z komórką szpiczaka, w wyniku której powstaje tzw. hybrydoma. Hybrdoma, w

przeciwieństwie do limfocytów B, posiada zdolność nieograniczonych podziałów komórkowych.

Przeciwciała

Przeciwciała poliklonalne

Metody immunochemiczne

Zdolność przeciwciał do bardzo specyficznego

oddziaływania z antygenem wykorzystywana jest

w wielu technikach immunologicznych

(immunochemicznych)

• Immunoprecypitacj a

• Chromatografia immunopowinowactwa

• Immunocytochemia (najczęściej z zastosowaniem

znaczników fluorescencyjnych)

• ELISA (najczęściej z zastosowaniem enzymów jako

znaczników)

• Western blotting (najczęściej z zastosowaniem

enzymów jako znaczniki

Plik z chomika:

Inne pliki z tego folderu:

Inne foldery tego chomika: