Biotechnologia enzymatyczna
Sprawozdanie
Kinetyka reakcji hydrolizy sacharozy katalizowanej przez inwertazę.
Kierunek: Biotechnologiarok IIIGrupa chemia 1Grupa laboratoryjna 4
Data odbycia zajęć: 30.10.2009
1. Cel ćwiczenia:
Wyznaczenie stałej Michaelisa- Menten oraz szybkości maksymalnej dla reakcji hydrolizy sacharozy katalizowanej przez inwertazę.
2. Przebieg ćwiczenia:
a. Grupa została podzielona na 5 sekcji, z których każda wykonała 100 ml roztworu sacharozy o określonym stężeniu w buforze octanowym (0.5, 1, 2, 3 oraz 4 g/100ml). W tym celu do kolby o pojemności 100 ml wsypano odpowiednią ilość sacharozy i dopełniono do kreski buforem octanowym.
b. Następnie z każdego rozcieńczenia pobrano po 25 ml roztworu, przeniesiono go do osobnej kolby.
c. Rozpoczynając od najmniejszego stężenia dodawano kolejno do kolb po 0,05 ml inwertazy, wprowadzano roztwór do rurki polarymetrycznej i mierzono kąt skręcania płaszczyzny światła spolaryzowanego po 2,4,6,8 i 10 minutach od wprowadzenia enzymu. Wyniki zanotowano w tabeli.
W celu ograniczenia błędów pomiarowych pomiary rozpoczęto od najmniejszego stężenia, a pomiędzy pomiarami rurkę polarymetru dokładnie przepłukiwano acetonem, i dopiero po jego odparowaniu wprowadzano kolejny roztwór, uważając przy tym, aby nie pozostawić we wnętrzu rurki żadnego pęcherzyka powietrza.
3. Opracowanie wyników:
Wyniki zebrano w tabeli oraz przeprowadzono odpowiednie obliczenia:
a) Stężenie substratu cs :
l – długość rurki polarymetrycznej; 2 dmα – kąt skręcania w stopniachc0 – stężenie wagowe sacharozy na początku pomiarów, g/100ml
b) Stężenie produktu cp :
cp – stężenie produktu, g/100ml
c0 – stężenie wagowe sacharozy na początku pomiarów, g/100ml
cs – stężenie substratu, g/100 ml
c) Szybkość początkowa vo (za szybkość początkową przyjmujemy stężenie produktu w 8 minucie pomiaru)
cp- stężenie produktu w 8 minucie
t- przyjmujemy czas: 8 minut
d) 1/c0 i 1/v0 potrzebne do sporządzenia wykresu dla równania Lineweavera-Burka.
4. Wyniki
Czas, min
Skręcalność, stopnie
Stężenie substratu Cs g/100 ml
Stężenie produktu C0-Cs, g/100 ml
Szybkość początkowa v0, g/min
1/Cs0
1/V0
Stężenie sacharozy w buforze octanowym: 0.504 g/100 ml
2
0.58
0.45
0.054
0.0305
3.846
32.787
4
0.46
0.38
0.124
6
0.34
0.31
0.194
8
0.25
0.26
0.244
10
0.17
0.21
0.290
Stężenie sacharozy w buforze octanowym: 1.012 g/100 ml
1.19
0.923
0.089
0.0590
1.852
16.949
1.01
0.819
0.193
0.73
0.656
0.356
0.53
0.540
0.472
0.36
0.442
0.570
Stężenie sacharozy w buforze octano...
peroni69